2月5日，國際學(xué)術(shù)期刊Scientific Reports在線發(fā)表中國科學(xué)院生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所叢堯研究組的最新研究成果“Development of a yeast internal-subunit eGFP labeling strategy and its application in subunit identification in eukaryotic group II chaperonin TRiC/CCT”。該項(xiàng)工作發(fā)展了酵母亞基中位eGFP標(biāo)簽定位（YISEL）方法，并結(jié)合冷凍電鏡三維重構(gòu)，首次明確了TRiC各亞基在其開環(huán)結(jié)構(gòu)中的定位，也為其他超大分子復(fù)合體的亞基準(zhǔn)確定位提供了新策略。

 

        細(xì)胞中蛋白質(zhì)的正確折疊對維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)具有重要作用。真核細(xì)胞中的分子伴侶素TRiC/CCT可以協(xié)助約10％的胞質(zhì)蛋白正確折疊，其功能的缺失與癌癥和神經(jīng)退行性疾病等密切相關(guān)。TRiC由8種不同的亞基組成雙環(huán)背對背堆疊結(jié)構(gòu)，且有特定的亞基排列方式。TRiC各亞基具有不同的底物結(jié)合能力、ATP結(jié)合以及水解能力，研究其亞基排布方式對于深入理解其結(jié)構(gòu)與功能至關(guān)重要。由于TRiC亞基同源但又各不相同，且高分辨率結(jié)構(gòu)信息有限，其亞基的空間排布一直存在爭議。

 

        叢堯研究員帶領(lǐng)博士研究生臧云祥及碩士研究生王胡萍等實(shí)驗(yàn)室成員，發(fā)展了YISEL（yeast internal-subunit eGFP labeling）方法，利用酵母同源重組方法分別在CCT1、CCT2、CCT4、CCT5、CCT6、CCT7亞基的氨基酸序列中間（非N-或者C-末端）插入eGFP標(biāo)簽。通過解析上述帶有eGFP標(biāo)簽的TRiC冷凍電鏡結(jié)構(gòu)，最終確定了各亞基在其開環(huán)結(jié)構(gòu)中的準(zhǔn)確定位，解決了一直以來的爭議。YISEL方法也為其他超大分子復(fù)合體的亞基準(zhǔn)確定位提供了新策略。

 

        該工作得到生化與細(xì)胞所周金秋和周兆才研究員的支持。該研究得到國家蛋白質(zhì)科學(xué)中心（上海）冷凍電鏡系統(tǒng)、數(shù)據(jù)庫與計(jì)算分析系統(tǒng)、質(zhì)譜系統(tǒng)、核磁系統(tǒng)、顯微鏡系統(tǒng)與規(guī)?；鞍踪|(zhì)制備系統(tǒng)的大力支持；并得到國家自然科學(xué)基金委、國家科技部、中國科學(xué)院戰(zhàn)略性先導(dǎo)科技專項(xiàng)（B類）、上海大科學(xué)中心高端用戶項(xiàng)目以及中國科學(xué)院重大科技基礎(chǔ)設(shè)施開放研究項(xiàng)目等的資助。

 

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